电穿孔仪工作时,会在含有细胞的介质中施加一个短时的、高强度的电场。这个电场通常由电极产生,电极间的距离和电场强度都是可以调节的参数。在电场作用下,细胞膜上的磷脂分子头部朝向电场的负极,而疏水的尾部则朝向正极,这种重新排列导致膜的稳定性下降,从而形成孔洞。这些孔洞是动态的,它们在电场作用后不久就会自行封闭。孔洞的存在时间通常很短,从几毫秒到几秒不等,具体时间取决于电场的强度、持续时间以及细胞类型。
电穿孔仪有多种类型,包括批量电穿孔和单细胞电穿孔,开放式电穿孔器和封闭式电穿孔器,以及指数衰减电穿孔器和方波电穿孔器。其基本组件包括电源、脉冲发生器、比色皿和电极。电源提供电能以产生电场,脉冲发生器控制脉冲的幅度、持续时间和频率,比色皿用于容纳细胞和分子,电极用于向细胞传递电脉冲。
电穿孔仪在基因转染、细胞融合、药物递送等多个实验情境中有广泛应用。例如,在基因转染中,电穿孔技术能够在短时间内使细胞膜形成大量的孔隙,提高了基因导入的效率;在细胞融合中,电穿孔技术可以促进不同细胞之间的融合,为研究细胞间的相互作用和跨物种基因交流提供了新的途径;在药物递送中,电穿孔技术可以提高药物的递送效率,尤其是对于一些难透膜的药物。
电穿孔技术具有灵活、适用范围广等优点,但也存在需要仔细优化参数、可能对细胞造成损伤等缺点。因此,在使用电穿孔仪时,需要根据具体的实验需求和细胞类型选择合适的电场参数,并严格控制操作条件以减少对细胞的损伤。